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蛋白质印迹法

优化蛋白质印迹转移方案以获得更清晰的图像

结果明确的蛋白质印迹法蛋白质分析

 

自 20 世纪 70 年代首次发现生物分子可以直接印迹到膜上(斑点 ELISA 或 DNA 斑点印迹),或从凝胶上转移到膜上(Southern 印迹法、Northern 印迹法、Western 印迹法)以来,蛋白质印迹(或称免疫印迹)技术就一直是蛋白质分析的基础。虽然目前蛋白质印迹法已用于常规蛋白质分析,但最终结果的质量取决于多种因素,包括如何选择最适合目标检测方法和方案的膜。 

 

蛋白质印迹法是分子生物学中的一种分析方法,通常用于研究和表征蛋白质的翻译后修饰,以便进行蛋白质鉴定和蛋白质生产验证。蛋白质印迹法简单但有效,已经应用于诸多领域,包括基础科学研究、生物制药、法医学和诊断学。

 

 

 

获得可靠且可重现的蛋白印迹结果

 

 

若要获得可靠和可重现的蛋白印迹结果,关键在于要具备清晰、背景弱的图像。产生问题的因素包括:

 

  • 低拉伸强度膜 
  • 背景信号高
  • 膜穿透率高
  • 与检测方法的兼容性有限 

 

若要出于分析目的评估蛋白质的相对丰度,采用高质量的膜至关重要。颇尔的印迹膜拉伸性能高,并且背景影响水平低。我们的转移膜产品可支持选择各种检测方法,而不影响质量。

 

首选的蛋白质印迹检测方法是什么?

 

 

虽然不同蛋白质印迹方案中的步骤都相同,但采用的检测方法各异。

 

  • 蛋白质印迹法的第一步是通过凝胶电泳从含有蛋白质混合物的样品中分离出蛋白质。颇尔的 Nanosep® 离心设备采用低蛋白结合 Omega™ 膜,是浓缩凝胶电泳样品的理想之选。 
  • 一旦从凝胶中分离,蛋白质就被转移到聚偏二氟乙烯 (PVDF) 膜或硝酸纤维素膜上。这一步用于固定蛋白质,以便进行进一步分析。 
  • 然后,用目标蛋白质特异性标记抗体对膜进行孵育。 
  • 孵育后,清洗膜以去除任何未结合的抗体,并通过各种免疫检测方法对膜进行进一步分析。

 

最常用的检测方法包括放射性标记、荧光团、显色和化学发光酶促反应。每种方案都有自身的优势和考虑因素: 

 

  • 放射性标记探针支持直接通过 X 射线胶片进行蛋白质检测;由于存在放射性,需要提高安全性要求。
  • 显色反应无需采用专用的检测设备,在膜上发生显色,可用肉眼观察。 
  • 化学发光反应采用光敏设备或材料进行处理,并对蛋白质印迹结果进行进一步分析。 
  • 荧光探针作为一种检测方法,可多次和同时检测分子量不同的多种蛋白质。

 

定性和定量结果均取决于背景与目标蛋白质信号之间的差异。

 

经过优化可获得低噪声和明确结果的转印膜

实验室Western Blotting

 

 

我们提供已针对蛋白质印迹应用进行优化的各种转印膜。我们的膜具有敏感性,可获得高分辨率的结果,并且背景影响和穿透率都很低。

 
  • 颇尔的 FluoroTrans® PVDF 转印膜已针对荧光检测进行优化,可确保背景极低,当暴露在荧光下时,不会对蛋白质检测和分析造成干扰。 使用荧光检测方法时,标准 Western 转印膜产生的自体荧光可能会掩盖特定信号,尤其是在波长较低的情况下。
  • 颇尔的 FluoroTrans W PVDF  转印膜非常适用于传统的染色和化学发光检测方法,因为它灵敏度高、穿透率低、背景低。 
  • 颇尔的 BioTrace™ NT  转印膜是一种纯硝酸纤维素无支撑载体,可与多种检测系统相容,有较高的蛋白质与核酸结合能力。 膜的均一性确保了这种高蛋白结合能力。其他硝酸纤维素膜的醋酸纤维素含量高,可降低膜的蛋白结合能力。  BioTrace NT 的物理特性(如高抗拉强度和亲水性等)提供了优异的处理能力,确保膜在转移过程中不会裂开、撕裂或破裂。 

 

由于膜不含清洁剂并且无支撑,因此可获得更清晰的图像,很少甚至不会出现失真,并且在电泳转印过程中,蛋白质穿透率低于竞争性硝酸纤维素介质。这种膜在批次间和批次内具有高度的一致性,可灵敏地检测印迹后的生物分子印迹。

 

表:蛋白质印迹转印膜选择指南

 

材料 硝酸纤维素 PVDF
产品 BioTrace NT FluoroTrans PVDF FluoroTrans W PVDF
应用

菌落/噬菌斑转印

蛋白质印迹转移

蛋白质斑点/狭缝印迹

(主要应用)

蛋白质 N 端测序

(同样适用)

蛋白质印迹转移

蛋白质斑点/狭缝印迹

(主要应用)

蛋白质印迹转移

(同样适用)

蛋白质 N 端测序

检测方法

放射性标记

探针

直接染色

荧光

酶-抗体

结合物

化学发光

显色

荧光

放射性标记

探针

直接染色

酶-抗体

结合物

化学发光

显色

放射性标记

探针

直接染色

酶-抗体

结合物

化学发光

显色

特性

无支撑织物

不添加清洁剂

100% 纯硝酸纤维素

耐化学腐蚀

不易燃

强度高

蛋白结合能力强

穿透率极低

检测灵敏

化学相容性良好

耐化学腐蚀

不易燃

强度高

蛋白结合能力强

穿透率极低

检测灵敏

化学相容性良好

优势

易于使用水溶液湿润,可减少试剂用量

强度非常高

建议用于蛋白质 N 端测序:无涂层

荧光背景低

适用于荧光团检测

蛋白质亲和力/亲合力最高,可实现最优转移

非常适合大多数蛋白质印迹应用 - 荧光团检测除外

灵敏度高;背景低

FluoroTrans® PVDF 和 FluoroTrans W PVDF 转印膜

优化蛋白质印迹转移方案以获得更清晰的图像
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BioTrace™ NT 硝酸纤维素转印膜

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