基因治疗和溶瘤细胞
病毒载体生产的工业化解决方案
无论您选择哪种工艺方法，我们的细胞培养，纯化和流体处理技术都可支持不同规模的病毒载体生产，例如腺相关病毒（AAV）和慢病毒（LV）。我们的关键技术既可以单独工作，也可以结合起来创建强大而灵活的集成生物处理平台，以适应您的独特处理要求，并加快从过程开发到生产的整个过程。我们提供的技术可从实验室稳步扩展，并被证明可在工业流程中使用，以降低您的技术转让风险。
无论您是希望使用端到端的集成平台来缩短开发时间，还是仅使用一项技术，我们都可以提供相应产品，知识和服务来帮助您将基因疗法推向市场。
对于基因治疗和溶瘤病毒疗法，其不同规模下对于产品制备工艺的可放大性与灵活性，必须能够快速实现工艺转移，即从工艺开发到符合cGMP生产过程。无论对于小规模还是大规模基因治疗产品的制备亦或是像CAR-T产品制备工艺中为满足体外细胞修饰而建立的纯化病毒工作种子都存在上述需求。
颇尔（PALL）的固定床和悬浮培养技术克服了工艺开发中面临的挑战，从而简化从实验室规模放大到工业规模的工艺流程，以及从工艺开发到受监管产品的生产的过程。整合从整合从贴壁/悬浮细胞培养、澄清、层析纯化、到超滤和无菌过滤各个技术平台，并提供整体解决方案，同时可集成一次性流体处理技术平台，为大规模生产提供封闭操作系统，从而保护产品及操作人员。
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颇尔咨询热线
基因治疗整体解决方案
病毒载体生产的工业化解决方案
上游病毒载体生产
上游病毒载体生产由多种单元操作构成，例如细胞扩增、载体细胞的转染或感染以及病毒载体生产。每个单元操作都包含大量变量，例如细胞/病毒培养平台、细胞系、培养基配方和生物过程参数（温度、pH值和溶氧），它们会影响最终病毒载体的生产能力。
病毒载体纯化
稳健的，可放大的纯化技术方案可以有效的减少诸如残留质粒DNA、宿主细胞DNA以及不含有目的基因载体等杂质，制备出高纯度、高浓度且满足需求的病毒载体。
一次性配储液
培养基、缓冲液、中间体和终产品的制备、储存以及转移，这些过程都需要小心控制，避免污染且需要符合cGMP要求。操作过程中应用一次性系统的高效体现在完好的数据记录以及加速工艺开发进程，简化生产工艺和保障产品质量。
基因及细胞治疗方法
病毒基因治疗
- 基因修饰在体内进行
- 注射用病毒
- 腺相关病毒（AAV）最常用的病毒类型
细胞治疗
- 供体来源的纯化细胞种群（同种异体细胞疗法）
- 正在研究的细胞类型（例如MSC，iPSC）
溶瘤病毒
- 病毒选择性杀死癌细胞
- 没有基因修饰
- 第一款基于病毒的商业产品（例如Imlygic，Amgen）
- 是单纯疱疹病毒（HSV）最常用的病毒类型
基因修饰的细胞治疗
- 如CAR-T细胞治疗
- 基因修饰在体外发生
- 病毒用于基因修饰或赋予患者细胞新功能
- 目前是自体的（患者来源的细胞），但正在研究同种异体
基因治疗中使用的病毒载体
| 基因修饰的细胞治疗e.g. CAR-T | 病毒基因治疗 | 溶瘤病毒 | |||
|---|---|---|---|---|---|
| 体外 | 体内 | ||||
| 参数 | Retrovirus 逆转录病毒 |
Lentivirus 慢病毒 |
Adeno-associated Virus (AAV) 腺相关病毒 |
Adenovirus 腺病毒 |
Herpex Simplex Virus (HSV) 单纯疱疹病毒 |
| 包膜 | 包膜 | 包膜 | 无包膜 | 无包膜 | 包膜 |
| 装载能力(kilobase) | 8 | 8 | 4.5 | 7.5 | 5 |
| 感染倾向 | 分裂细胞 | 广泛 | 除造血干细胞 | 广泛 | 上皮细胞 |
| 炎症反应 | 低 | 低 | 低 | 高 | 高 |
| 是否整合到宿主基因组 | 整合 | 整合 | 整合/不整合 | 不整合 | 整合/不整合 |
| 基因表达 | 稳定 |
稳定 | 较稳定 | 瞬间 | NA |
| 大小(nm) | 100 | 120 | 20-25 | 70-120 | 150 |
病毒表达体系
| 三质粒转染体系 | 昆虫细胞+杆状病毒 | 稳转细胞株 | |
|---|---|---|---|
| 病毒生产 | 腺相关病毒/慢病毒 | 腺相关病毒 | 逆转录病毒 / 慢病毒 ( 早期阶段 )/ 腺相关病毒 ( 发展阶段) |
| 培养体系 | 贴壁/悬浮 | 悬浮 | 贴壁/悬浮 |
| 转染所需 | 质粒，转染试剂 | 杆状病毒 | 前期工作花费精力大，但后 期投入小 |
| 优势 | 大规模生产金标准，可放大(使用 iCELLis) 病毒质量稳定，投入市场快 |
可放大 | 潜能大 |
| 劣势 | 质粒成本高 不能做细胞株优化 | 起始病毒准备困难 需要很多优化 | 技术难度大 |
病毒载体和质粒生产工艺流程
上游各平台规模解决方案
| 生产平台 | 细胞种子培养 | 细胞培养 |
|---|---|---|
| 研发平台 | 细胞工厂 | iCellis Nano (0.53-4m2) |
| 生产平台（贴壁） | Xpansion 10/50/100/200 | iCellis 500 (66-500m2) |
| 生产平台（悬浮） | Allegro XRS 25 | Allegro STR 50/200/1000/2000 |
下游各平台规模解决方案
| 收获体积(L) | 澄清深层过滤 | 层析 | 超滤/透析(UF/DF) | 除菌过滤(0.2 µm) |
|---|---|---|---|---|
| < 0.8 L | Supracap™ 50 capsule | Mustang XT Acrodisc® unit | Cadence® SUTFF module | Acrodisc fIlters |
| 1 - 10 L | Supracap 100 capsule | Mustang® 60 mL capsule | Cadence® SUTFF module | Mini Kleenpak™ 20 capsules |
10 - 1000 L |
Stax disposable filter | Mustang XT5000 filter | Cadence® SUTFF module | Kleenpak Nova capsule |
| Hardware | Allegro MVP single-use system | Allegro MVP single-use system |